jueves, 8 de enero de 2015

Técnicas Moleculares

En principio se denomina así a todas las técnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza, visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo, amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas (clonación de fragmentos en bacterias u otros vectores como virus y PCR), corte de una determinada región con enzimas de restricción para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment lengt polymorphism), que significa: diferencias en los tamaños de los fragmentos de restricción debido a polimorfismos en el ADN entre otras.
Todas estas técnicas tiene diversas aplicaciones generalmente en el diagnóstico de enfermedades hereditarias, búsqueda de alelos mas o menos frecuentes asociados a una característica que nos interesa seleccionar, diagnóstico de contaminación bacteriana en alimentos diagnóstico viral o de infección viral (HIV, Hepatitis C, PIF, otros), selección de marcadores moleculares para asistir en el mejoramiento genético de una especie, test de paternidad, diganóstico de identidad forense, etc.
La primera técnica que todas las demás necesitan es la extracción del ADN, y para ello es necesario purificarlo desde cualquier tejido aunque usualmente se hace a partir de sangre. Se basa en una serie de lavados de la muestra y agregado de proteinasas que eliminan las proteínas del medio, detergentes para elIminar las membranas plasmáticas y luego ir purificando el ADN de esa mezcla de ARN proteínas y restos celulares.



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Análisis de PCR

Tema: Estandarización de la PCR para el diagnóstico del virus de la hepatitis B en Perú. 

Objetivo: Diagnosticar pacientes infectados con hepatitis Buenas
Muestra: suero 
ADN: ADN viral
Gen: Gen del antígeno de superficie HBs Ag y HBe Ag
PCR: PCR estándar 

viernes, 12 de diciembre de 2014

PCR PARA DIABETES MELLITUS

La diabetes es una enfermedad crónica que se ven afectados muchos genes, esta matriz se puede utilizar para estudiar los modelos de la obesidad y la diabetes, para la detección de la terapéutica y sus objetivos, y al perfil del efecto de diversos factores epidemiológicos y ambientales en la expresión de genes en diferentes tejidos o líneas celulares. El uso de PCR en tiempo real, se puede analizar con facilidad y de forma fiable la expresión de un panel enfocado de genes relacionados con la diabetes con este arreglo.


viernes, 21 de noviembre de 2014

EPIGENETICA EN DIABETES

Las células beta pancreáticas sintetizan y secretan insulina. La regulación de la expresión del gen de insulina (INS) no se comprende del todo, pero existe evidencia de involucramiento epigenético tanto de estudios sobre la estructura de la cromatina como en el nivel de metilación del DNA. En una línea de células beta de ratón, el promotor proximal Ins es hiperacetilado en los residuos lisina de la histona 3 (H3) e hipermetilado en la lisina 4 de H3 (H3K4), marcas asociadas con una estructura de eucromatina abierta y genes transcritos activamente. Estas marcas no son detectadas en las líneas celulares no beta.





domingo, 16 de noviembre de 2014

Alteraciones en la Traducción en la diabetes




La traducción como mecanismo genético explica el paso de la información genética ADN que debe ser trascripta en ARNm y luego a proteínas. Existen otras formas de ARN, como el ARN ribosómico (ARNr) o el ARN de transferencia (ARNt), que catalizan reacciones biológicas, controlan la expresión de genes o interaccionan con cascadas de señalización dentro de las células. En los últimos años se ha descrito una nueva forma de RNA, el ARNlnc. Se trata de una molécula que no se traduce a proteína y se puede encontrar en diferentes partes de la célula.Los ARNlnc son cadenas largas de ARN codificadas en el genoma. Se trata pues de genes fuera de los genes clásicos, ya que éstos tradicionalmente se relacionan con la producción de proteínas. Su función todavía se desconoce, aunque se ha visto que los ARNlnc pueden llegar a ser muy específicos de diferentes tipos de tejidos y se han relacionado en algunos casos con cáncer, ciclo celular, el ensamblado de los ARNs o la regulación transcripcional.

Los genes HNF1A (OMIM 142410)9 , HNF1B (OMIM 189907)10 y HNF4A (OMIM 600281)11, que codifican las proteínas HNF1_, HNF-1` y HNF-4_ , son miembros de una familia de genes que codifican proteínas que actúan como factores de transcripción y se expresan en otros órganos además del páncreas y el hígado.
La diabetes producida por mutaciones en los genes que codifican las proteínas IPF1` (MODY 4) y NeuroD1 también denominado BETA2 (MODY 6), proteínas que actúan sobre la región más activa del promotor de la insulina32, causan un fenotipo similar a MODY 1, 3 y 5; no obstante, algunas mutaciones en estos genes se asocian a fenotipos específicos caracterizados por una edad de comienzo más tardía, entre la cuarta y sexta décadas de la vida, la presencia en algunos pacientes de obesidad y unos valores de insulina circulantes que no difieren de los de la población sana.




jueves, 6 de noviembre de 2014

Alteraciones en la Transcripción en la Diabetes Tipo 1



Una de las funciones de HNF-1β es la regulación de la expresión génica en tejidos como el riñón. En este órgano, el promotor proximal del gen Pkhd1 tiene un sitio de unión para HNF-1β, por lo que las mutaciones en este factor de transcripción inhiben la expresión de HNF-1β y conducen a la formación de quistes. Esto es lógico, puesto que las mutaciones del gen Pkhd1 son responsables de la forma autosómica recesiva de la enfermedad renal poliquística.


Tomado de:
http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1137-66272011000300024

viernes, 31 de octubre de 2014

Alteraciones en la replicación del ADN en la diabetes tipo

La diabetes mellitus tipo 1 ( DM1 ) es una enfermedad compleja, resultado de la interacción de factores genéticos, epigenéticos y factores ambientales . Tras el éxito inicial de vinculación basado en la familia analiza , que dejó al descubierto la fuerte vinculación y de asociación entre las variantes de genes HLA y T1D , estudios de asociación del genoma realizados con plataformas de genotipado el polimorfismo de un solo nucleótido de alta densidad proporcionaron pruebas para una serie de nuevos loci , aunque mapeo fino y caracterización de estas nuevas regiones que queda por realizar. Este hecho, junto con la evidencia de varias modificaciones epigenéticas de la expresión génica , es una prueba convincente de la compleja interacción entre factores genéticos y ambientales . En T1D , fenómenos epigenéticos , como la metilación del ADN , modificaciones de las histonas , y microRNA desregulación , se han asociado con una expresión génica alterada . El aumento de la evidencia epidemiológica y experimental apoya el papel de las alteraciones genéticas y epigenéticas en la etiopatogenia de la diabetes .